Класическа колона хроматография
2. хроматографска колона (тип въртене)
3. хроматографска колона (ръководство)
*** Ценовата листа за цялото по -горе, попитайте ни да получим
Описание
Технически параметри
Класическа колона хроматографияе основна техника за разделяне, широко използвана в химията и биохимията за пречистване и изолиране на компоненти от смеси ., тя работи на принципа на диференциално разделяне на вещества между стационарна фаза, опакована в колона и мобилна фаза, която преминава през нея .}}
The stationary phase, typically a solid adsorbent like silica gel or alumina, is tightly packed into a glass or plastic column. The sample mixture is introduced at the top of the column, followed by the addition of the mobile phase-a solvent or mixture of solvents. As the mobile phase percolates down the column, components of the mixture interact differently with the stationary phase based on their chemical Свойства, като полярност, размер и афинитет към адсорбента .
Съединенията с по -силни взаимодействия със стационарната фаза се движат по -бавно през колоната, докато тези с по -слаби взаимодействия пътуват по -бързо . Тази диференциална миграция води до разделяне на сместа на отделни ленти или фракции, които могат да се събират поотделно .
It is valued for its simplicity, versatility, and cost-effectiveness. It is suitable for both analytical-scale separations, to identify and quantify components, and preparative-scale separations, to obtain larger quantities of purified substances. Despite the advent of more advanced techniques like HPLC, it remains a staple in many laboratories due to its accessibility and effectiveness for широк спектър от приложения .
Параметри
Основни принципи
|
|
Класическа колона хроматография, also known as liquid-solid chromatography, is a technique for separating solutes based on the difference in distribution between a stationary phase (usually a solid adsorbent) and a mobile phase (solvent). The basic principle can be summarized as follows: with the help of the fixed phase, the solute of the solution is adsorbed, and then the components of the mixture are further separated into discrete components by using the different Коефициентите на разпределение между фиксираната фаза и подвижната фаза . In column chromatography, the stationary phase is usually composed of porous particulate matter (such as silica gel, alumina, activated carbon, etc.), which has a large specific surface area and adsorption center, and can form hydrogen bonds with solute molecules, van der Waals forces and other interactions, resulting in adsorption. The mobile phase is responsible for elution of solute Молекулите от стационарната фаза и неговият подбор трябва да се определят според полярността на разтвореното и адсорбционните характеристики на адсорбента . В процеса на разделяне, смесеният разтвор се въвежда в колоната, съдържаща неподвижната фаза . С потока на подвижната фаза, компонентите се движат надолу по колоната с различни скорости поради различния адсорбционен капацитет на неподвижната фаза . По -полярните компоненти обикновено са лесни за придружаване от стационарната фаза, така че се движат бавно {{2}. Полярността лесно се отнема от подвижната фаза, а скоростта на движение е по -бърза . По този начин всеки компонент образува редица цветни ленти на колоната, за да постигне разделяне . |
Аминокиселинен анализ
Аминокиселинният анализ обикновено се извършва с помощта на течна хроматография, от коятоКласическа колона хроматографияis a commonly used technique. In this method, ion exchange resin is used as stationary phase to separate amino acids according to the difference of electric charge. Amino acids may need to be converted to a more detectable form by derivatization before the sample enters the column. Derivatization can improve the separation effect and detection sensitivity of amino acids on Хроматографска колона .
- Sample preparation: The protein sample is hydrolyzed to amino acids. This can be achieved by acid hydrolysis or enzymatic hydrolysis. The hydrolyzed sample needs to undergo proper pre-treatment, such as removal of protein residues.
- Дериватизация: За да се подобри чувствителността на аминокиселинни анализи за откриване и характеристики на селекция на разделяне, често се изисква производно на аминокиселини ., има два вида производни на аминокиселини: често използвани деривации на колони и пост - деривации на колони . Често използваните производни на прес колони включват деривати на фенилен . Често използваните производни на предцина, включват деривати на фенилен. (Fmoc-ci), фенил изотиоцианат (PITC), дансилхлорид (дансил-Ci), 2, 4- dinitrofluorobenzene (fdnb) и т.н. .
- Избор на колони: Изберете колоната, подходяща за анализ на аминокиселини, като колона за йонен обмен, колона C18, C8 колона и др. .
- Настройка на хроматографско състояние: Задайте подходящите хроматографски условия, включително подвижна фаза, дебит, градиентна програма и др. . Общите мобилни фази включват буфери, съдържащи йонни двойки, като буфери Formate .
- Sample analysis: The sample after hydrolysis and derivatization is injected into the chromatograph for analysis. By comparing the peak area and concentration of each amino acid in the sample on the standard curve, the content of amino acid in the sample can be quantitatively analyzed.
- Обработка на данни: Според пиковата площ и данните за концентрацията, получени от анализа, съдържанието на всяка аминокиселина в пробата се изчислява и данните се обработват и резултатът се отчита .
В анализа на аминокиселините има много примери за приложения и по -долу са изброени няколко специфични случая:
- Откриване на основни аминокиселини: Употребата може да открие съдържанието на основни аминокиселини, като изолевцин, левцин, лизин и др.
- Determination of amino acids in Chinese medicine: In the analysis of Chinese medicine, it is also widely used to determine the content of amino acids in Chinese medicine. For example, when determining the content of paeoniflorin in Wuji Baifeng pills, a column with octadecylsilane bonded silica gel as the filler can be used for analysis, and the column can also be used for the separation and determination of other amino киселини .
- Determination of amino acids in food: Amino acid content in food is also one of the important application areas. For example, in the determination of nucleotides in infant food and dairy products, five nucleotides in milk powder can be isolated and determined using a C18-T reversed-phase column or a column with equivalent performance. At the same time, the method can Също така се използва за определяне на съдържанието на аминокиселини в други храни, което предоставя важна основа за контрол на качеството на храните и оценка на храненето .
При анализ на аминокиселини е необходимо да се изберат подходящи реагенти на дериватизацията и условия на дериватизация, за да се подобри чувствителността и точността на откриването .
Изборът на колона и настройката на хроматографските условия оказват важно влияние върху ефекта на разделяне и трябва да бъде оптимизиран според специфичните проби и аналитични нужди .
В процеса на анализ е необходимо да се обърне внимание на условията на подготовка и съхранение на пробите, за да се избегне влиянието на замърсяването на пробата и разграждането върху резултатите от анализа .
Какво е производно лечение
Дериватизацията е важна техника за предварително третиране в пробата вКласическа колона хроматография, който има за цел да подобри ефективността на откриването и ефекта на разделяне на аналитите . Следното е подробно обяснение на процеса на дериватизация:
|
► Цел на деривативно лечение 1) Подобрена ефективност на откриване: Чрез въвеждане на функционални групи, които са лесни за откриване, аналитът генерира по -силен сигнал на детектора, подобрявайки чувствителността и точността на откриването . |
|
|
|
► Видът на деривативното лечение 1) производно пред колона: |
|
Извличането след колона има предимствата на добрата възпроизводимост и по-малко влияещите фактори, но изисква допълнителни инструменти и оборудване . 1) Improved detection sensitivity: For example, in amino acid analysis, the introduction of easily detectable functional groups (such as fluorophores) through pre-column derivatization can increase the signal strength of amino acids on the detector, thereby improving the sensitivity of the detection. |
|
Класическа колона хроматография, основополагаща техника в науката за разделяне, продължава да се развива с напредък в материалите и методологията, като гарантира своята релевантност както в научните и индустриалните приложения .
One promising direction is the integration of novel stationary phases. Innovations in material science have led to the development of high-performance packing materials with enhanced selectivity, stability, and efficiency. These materials allow for better resolution and faster separations, catering to the growing demand for high-throughput analysis in industries such as pharmaceuticals and biotechnology.
Освен това, той все повече се комбинира с усъвършенствани техники за откриване, като масспектрометрия, за да се подобри чувствителността и точността . Тази хибридизация дава възможност за по -обширен анализ на сложни смеси, разширявайки приложимостта на техниката в полета като метаболомика и протеомика .
В заключение бъдещето се крие в адаптирането му към нови материали, миниатюризация и интеграция с авангардни методи за откриване, като се гарантира нейната продължителна полезност в съвременните научни и индустриални пейзажи .
Популярни тагове: Класическа колона хроматография, производители на хроматография в Китай за класическа колона, доставчици, фабрика
Един чифт
Конвенционална колона хроматографияИзпрати запитване
